在ELISA試劑盒操作中,洗滌是zui主要的關(guān)鍵技術(shù),應(yīng)引起操作者的高度重視,操作者應(yīng)嚴(yán)格按要求洗滌,不得馬虎。
首先洗滌在ELISA過程中雖不是一個(gè)反應(yīng)步驟,但卻也決定著實(shí)驗(yàn)的成敗。ELSIA就是靠洗滌來達(dá)到分離游離的和結(jié)合的酶標(biāo)記物的目的。
ELISA試劑盒洗滌液使用原則
1.某一項(xiàng)目的洗液建議使用該試劑盒內(nèi)的洗液;
2.同一elisa試劑盒洗液用完了,建議采用同一批號的洗液;
3.同一批號的洗液也用完了,建議采用同一項(xiàng)目的試劑洗液;
4.同一項(xiàng)目的洗液用完了,建議使用該項(xiàng)目其他廠家的洗液;
5.同一項(xiàng)目所有廠家都用完了,建議采用同一系列項(xiàng)目的洗液(比如甲乙丙丁戊庚肝抗體檢測,屬于肝炎系列,急用時(shí)可以暫時(shí)混用);
6.不建議國產(chǎn)洗液與進(jìn)口洗液混用,也更不建議不同系列項(xiàng)目的洗液混用,這兩點(diǎn)都是因?yàn)橄匆旱呐渲贸煞植煌?,特別是不同項(xiàng)目的洗液(正規(guī)試劑廠家),主要組分都不太一樣。
雖然對強(qiáng)陽性標(biāo)本影響不是很大,但對于臨界陽性陰性(灰區(qū))標(biāo)本影響較大,所以不提倡不同系列項(xiàng)目洗液混用。
ELISA試劑盒洗滌方式
(1)浸泡式
a.吸干或甩干孔內(nèi)反應(yīng)液;
b.用洗滌液過洗一遍(將洗滌液注滿板孔后,即甩去);
c.浸泡,即將洗滌液注滿板孔,放置1-2分鐘,間歇搖動,浸泡時(shí)間不可隨意縮短;
d.吸干孔內(nèi)液體。吸干應(yīng)*,可用水泵或真空泵抽吸,也可甩去液體后在清潔毛巾或吸水紙上拍干;
e.重復(fù)操作c和d,洗滌3-4次(或按說明規(guī)定)。在間接法中如本底較高,可增加洗滌次數(shù)或延長浸泡時(shí)間。
微量滴定板多采用浸泡式洗滌法。洗滌液多為含非離子型洗滌劑的中性緩沖液。聚苯乙烯載體與蛋白質(zhì)的結(jié)合是疏水性的,非離子型洗滌劑既含疏水基團(tuán),也含親水基團(tuán),其疏水基團(tuán)與蛋白質(zhì)的疏水基團(tuán)借疏水鍵結(jié)合,從而削弱蛋白質(zhì)與固相載體的結(jié)合,并借助于親水基團(tuán)和水分子的結(jié)合作用,使蛋白質(zhì)回復(fù)到水溶液狀態(tài),從而脫離固相載體。洗滌液中的非離子型洗滌劑一般是吐溫20,其濃度可在0.05%-0.2%之間,高于0.2%時(shí),可使包被在固相上的抗原或抗體解吸附而減低試驗(yàn)的靈敏度。
(2)流水沖洗式
流水沖洗法zui初用于小珠載體的洗滌,洗滌液僅為蒸餾水甚至可用自來水。洗滌時(shí)附接一特殊裝置,使小珠在流水沖擊下不斷地滾動淋洗,持續(xù)沖洗2分鐘后,吸干液體,再用蒸餾水浸泡2分鐘,吸干即可。浸泡式猶如盆浴,流水沖洗式則好比淋浴,其洗滌效果更為*,且也簡便、快速。已有實(shí)驗(yàn)表明,流水沖洗式同樣也適用于微量滴定板的洗滌。洗滌時(shí)設(shè)法加大水流量或加大水壓,讓水流沖擊板孔表面,洗滌效果更佳。
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