ELISA試劑盒中,各首要構(gòu)成試劑的挑選留神事項其間包含:
(1) 固相載體的挑選:許多物質(zhì)可作為固相載體,如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纖維素等。其方法可所以凹孔平板、試管、珠粒等。如今常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不論何種載體,在運用前均可進行挑選:用等量抗原包被,在同一試驗條件下進行反響,查詢其顯色反響是不是均一性,據(jù)此判明其吸附功用是不是出色。
(2) ELISA試劑盒包被抗體的挑選:ELISA試劑盒將抗體吸附在固相載體表面時,央求純度要好,吸附時一般央求PH在9.0~9.6之間。吸附溫度,時刻及其蛋白量也有必定影響,一般多選用4℃ 18~24小時。蛋白質(zhì)包被的zui適濃度需進行滴定:即用不一樣的蛋白質(zhì)濃度(0.1、1.0和10μg/ml等)進行包被后,在其它試驗條件相一起,查詢陽性標本的OD值。挑選OD值zui大而蛋白量起碼的濃度。對于大都蛋白質(zhì)來說一般為1~10μg/ml。
(3) 酶符號抗體工作濃度的挑選:首先用直接ELISA法進行開端效價的滴定(見酶符號抗體部份)。然后再固定其它條件或選用“方陣法”(包被物、待檢樣品的參看品及酶符號抗體分別為不一樣的稀釋度)在正式試驗體系里地滴定其工作濃度。
(4) ELISA試劑盒酶的底物及供氫體的挑選:ELISA試劑盒對供氫體的挑選央求是價廉、安全、有明顯地顯色反響,而自身無色。有些供氫體(如OPD等)有潛在的致癌效果,應留神防護。有條件者應運用不致癌、靈敏度高的供氫體,如TMB和ABTS是如今較為滿足的供氫體。底物效果一段時刻后,應參加強酸或強堿以停止反響。一般底物效果時刻,以10-30分鐘為宜。底物運用液有必要新鮮制造,尤其是H2O2在臨用前參加。
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